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做好RNA轉染的幾點建議 已有1人參與
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1.純化RNA 在轉染前要確認RNA的大小和純度。為得到高純度的RNA,推薦用玻璃纖維結合,洗脫或通過15-20%丙烯酰胺膠除去反應中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和鹽離子。注意:化學合成的RNA通常需要跑膠電泳純化(即PAGE膠純化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶將導致RNA實驗失敗。由于實驗環(huán)境中RNA酶普遍存在,如皮膚,頭發(fā),所有徒手接觸過的物品或暴露在空氣中的物品等,此保證實驗每個步驟不受RNA酶污染非常重要。 3.健康的細胞培養(yǎng)物和嚴格的操作確保轉染的重復性 通常,健康的細胞轉染效率較高。此外,較低的傳代數(shù)能確保每次實驗所用細胞的穩(wěn)定性。為了優(yōu)化實驗,推薦用50代以下的轉染細胞,否則細胞轉染效率會隨時間明顯下降。 4.選擇合適的轉染試劑 針對RNA制備方法以及靶細胞類型的不同,選擇好的轉染試劑和優(yōu)化的操作對RNA實驗的成功至關重要,如Entranster-R試劑。 |
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