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書(shū)畫(huà)江湖新蟲(chóng) (小有名氣)
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細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中為什么不能加血清？
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傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染試劑有一定的細(xì)胞毒性，在轉(zhuǎn)染過(guò)程由于提高細(xì)胞的通透性因而不能在培養(yǎng)基中添加抗生素。如，陽(yáng)離子脂質(zhì)體。帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。血清中含有大量的蛋白質(zhì)，在轉(zhuǎn)染過(guò)程中，帶負(fù)電的蛋白質(zhì)可能干擾陽(yáng)離子脂質(zhì)體對(duì)核酸的吸附，影響轉(zhuǎn)染效率。另外，使用脂質(zhì)體等轉(zhuǎn)染試劑時(shí)，由于含血清轉(zhuǎn)染會(huì)將血清中的蛋白帶入細(xì)胞，引發(fā)細(xì)胞毒性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低，故不能有血清轉(zhuǎn)染。這些轉(zhuǎn)染試劑要求在轉(zhuǎn)染前換無(wú)血清培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染后4-6h在更換成有血清培養(yǎng)基，這其實(shí)是為了減輕轉(zhuǎn)染造成的細(xì)胞毒性。 不同的細(xì)胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的。最好是在第一次實(shí)驗(yàn)前做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)，比如：HeLa，293，CHO，COS7， MCF－7，HepG2等細(xì)胞，是否加血清，對(duì)不同的細(xì)胞是有不同的影響的，有些細(xì)胞是可以有血清的，有些加血清就會(huì)受影響。所以，普通的轉(zhuǎn)染試劑一定要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，和條件優(yōu)化。 轉(zhuǎn)染后在6小時(shí)左右最好換液且換為有血清的培養(yǎng)基，其一因?yàn)槠胀ㄞD(zhuǎn)染試劑對(duì)細(xì)胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細(xì)胞的死亡。轉(zhuǎn)染時(shí)不加血清是防止血清的干擾作用，轉(zhuǎn)染后可適時(shí)加入。加入過(guò)早會(huì)引起未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)，過(guò)晚會(huì)引起較多細(xì)胞死亡�？蓪�(shí)時(shí)觀察1/5細(xì)胞變圓的時(shí)候加入血清。 現(xiàn)在市面上也有一些改進(jìn)了的轉(zhuǎn)染試劑，可以在轉(zhuǎn)染時(shí)含有血清，如Entranster試劑，只濃縮包裹核酸不會(huì)將血清帶入細(xì)胞。Entranster采用有血清轉(zhuǎn)染，不用在有血清和無(wú)血清之間更換，增加工作量，同時(shí)有血清轉(zhuǎn)染不僅不造成細(xì)胞毒性，而且由于血清的存在，有利于細(xì)胞的狀態(tài)維護(hù)，提高轉(zhuǎn)染效率。 由于Entranster的內(nèi)毒素和細(xì)胞毒性都非常之低，加上轉(zhuǎn)染復(fù)合物能夠高效的在完全培養(yǎng)基中形成，因而整個(gè)轉(zhuǎn)染過(guò)程可以在含血清而且是含有抗生素的培養(yǎng)基中操作，無(wú)需更換培養(yǎng)基，這極大的方便轉(zhuǎn)染操作！適用于包括干細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，原代細(xì)胞和其他方法難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的轉(zhuǎn)染在內(nèi)的多種真核細(xì)胞。 細(xì)胞毒性的大小往往意味著對(duì)細(xì)胞生理活動(dòng)影響的大小。這會(huì)對(duì)相關(guān)研究數(shù)據(jù)產(chǎn)生嚴(yán)重的干擾，甚至影響研究的結(jié)論。因此，選擇一種高效方便的轉(zhuǎn)染試劑是細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功的關(guān)鍵。 |
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