 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 642 | 回復(fù): 0 | |||
[交流]
細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率低下的陷阱
|
|
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的一種常用的技術(shù)手段。而轉(zhuǎn)染效率低下卻是實(shí)驗(yàn)人員經(jīng)常遇到的問題，尤其是原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染難度更大�，F(xiàn)分享幾個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)常見的幾個(gè)陷阱，望實(shí)驗(yàn)人員能夠注意。 1.準(zhǔn)備不足 做細(xì)胞轉(zhuǎn)染的時(shí)候，在開展正式實(shí)驗(yàn)前要多做預(yù)試驗(yàn)，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件包括：轉(zhuǎn)染試劑的用量、DNA密度、細(xì)胞密度、試劑和DNA混合孵育時(shí)間等等。 2.細(xì)胞污染 細(xì)胞污染也是造成細(xì)胞死亡，轉(zhuǎn)染效率低下的一大原因。首先，轉(zhuǎn)染細(xì)胞用的質(zhì)粒必須保證無菌。而現(xiàn)在市場(chǎng)上的一般的質(zhì)粒提取試劑盒都做不到絕對(duì)無菌。分享一個(gè)小秘訣：將提完質(zhì)粒后或者提的最后一步，用75％乙醇沉淀，這樣就除菌了。 3.質(zhì)粒質(zhì)量問題 轉(zhuǎn)染用的質(zhì)粒首先要保證數(shù)量，一般為2μg以上。質(zhì)粒純度不夠或者含有細(xì)菌LPS或其他對(duì)細(xì)胞有毒害作用的物質(zhì)，也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。這個(gè)時(shí)候，就應(yīng)該對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行純化和濃縮。 4.細(xì)胞狀態(tài)不好 細(xì)胞狀態(tài)不好，會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低下。一般進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)該處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。如果是貼壁細(xì)胞的話，貼壁率應(yīng)該在70-80%；如果是懸浮細(xì)胞的話，應(yīng)該是6×105個(gè)/孔（24孔板），一般是轉(zhuǎn)染前一天換液，轉(zhuǎn)染前用無血清培養(yǎng)基或PBS洗細(xì)胞一次。 5.轉(zhuǎn)染試劑問題 脂質(zhì)體試劑毒性較大，易造成細(xì)胞死亡和轉(zhuǎn)染效率底下�？蛇x擇非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，如Entranster試劑。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
考研求調(diào)劑，工科，總分304
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
新疆大學(xué)地質(zhì)與礦業(yè)工程學(xué)院招生
已經(jīng)有22人回復(fù)
-
交大前校長(zhǎng)王樹國(guó)：現(xiàn)在最先進(jìn)的科技并不在大學(xué)實(shí)驗(yàn)室，而是在企業(yè)研究院
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
286求調(diào)劑
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
0703求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
334求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
0817找調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
調(diào)劑的同學(xué)，走過路過，不要錯(cuò)過
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
288求調(diào)劑085600材料與化工
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
【求調(diào)劑】293分環(huán)境工程求調(diào)劑材料/化工，服從調(diào)劑，抗壓能力強(qiáng)！
已經(jīng)有11人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 書畫江湖 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 22408 275分求調(diào)劑 +3 | 宇智波比 2026-03-03 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +7 | wxz2 2026-03-03 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)工程求調(diào)劑 +12 | 化工人999 2026-03-04 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，不管什么專業(yè)，我是可塑造的人才一枚，希望遇到知己老師撈撈我 +4 | 13102137290 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩調(diào)劑 +5 | 慕辰123 2026-03-05 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 呼呼？~+123456 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 呼呼？~+123456 2026-03-06 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +13 | February_Feb 2026-03-01 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +3 | 林小星發(fā)大財(cái) 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化工282求調(diào)劑一志愿211 +5 | NA0912 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿清華深研院材料專碩294分，專業(yè)課111分，本科中南大學(xué)材料，有六級(jí)，有工作經(jīng)驗(yàn) +3 | H14528 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程 求調(diào)劑 +7 | xiiiia 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程專碩307 一志愿211 四六級(jí)已過 求調(diào)劑 +5 | ccc! 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 267調(diào)劑求助 +5 | 聰少OZ 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) 學(xué)碩 理工科均可 不區(qū)分研究方向 總分279求調(diào)劑 +7 | 1一11 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +8 | 26調(diào)劑 2026-03-03 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 能動(dòng)297求調(diào)劑，本科川大 +4 | 邵11 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 347分電子信息專碩求調(diào)劑 +3 | 咕嘟咕嘟1 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +6 | 好運(yùn)連綿不絕 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +3 | L-xin? 2026-03-01 | 6/300 |
|