 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 505 | 回復(fù): 0 | |||
[交流]
懸浮細(xì)胞siRNA轉(zhuǎn)染步驟
|
|
懸浮細(xì)胞的siRNA轉(zhuǎn)染操作步驟，以24孔板siRNA轉(zhuǎn)染為例 1.提前1天細(xì)胞種植 懸浮細(xì)胞：采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，數(shù)量為常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)的1/3進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。如某細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)是6×105，那么就用2×105的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。 2.轉(zhuǎn)染過程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入一定量無(wú)血清稀釋液，充分混勻，制成RNA稀釋液，終體積為25μl。 注意：無(wú)血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無(wú)血清DMEM或1640。 ⑵取1ul的EntransterTM-R4000，然后加入24ul無(wú)血清稀釋液體，充分混勻，制成EntransterTM-R4000稀釋液，終體積為25μl。室溫靜置5分鐘。 ⑶將EntransterTM-R4000稀釋液和RNA稀釋液充分混合（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上）混合，室溫靜置15分鐘。轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成。 ⑷將50μl轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加到有0.45ml全培養(yǎng)基（可含10%血清和抗生素）的細(xì)胞上，前后移動(dòng)培養(yǎng)皿，混合均勻。 注意：對(duì)本試劑，采用含血清的全培養(yǎng)基有助于提升轉(zhuǎn)染效率。 ⑸轉(zhuǎn)染后6小時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)，如狀態(tài)良好可不必更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24-96小時(shí)得到結(jié)果。 注意：1.siRNA轉(zhuǎn)染后，繼續(xù)培養(yǎng)24-72小時(shí)在mRNA水平得到結(jié)果，繼續(xù)培養(yǎng)24-96小時(shí)在蛋白水平得到結(jié)果。mRNA轉(zhuǎn)染后，根據(jù)需要在24小時(shí)后得到結(jié)果。 2.在部分實(shí)驗(yàn)室，由于血清和培養(yǎng)條件等差異，轉(zhuǎn)染后鏡下培養(yǎng)基中可能出現(xiàn)少量黑點(diǎn)狀沉淀，為轉(zhuǎn)染試劑和血清中蛋白結(jié)合產(chǎn)物，不影響轉(zhuǎn)染結(jié)果和細(xì)胞狀態(tài)，可通過換液除去。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
材料化工求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿南京大學(xué)資源與環(huán)境專業(yè)283分求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
085600材料與化工 292分 求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
材料調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
334求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
申博
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
接受26屆調(diào)劑生
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
專碩數(shù)二英二0854總分317，過六級(jí)，有電賽國(guó)賽江蘇省二，省級(jí)大創(chuàng)，論文等
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
070300調(diào)劑一志愿南京大學(xué)化學(xué)專業(yè)，初試273分，有論文有專利有競(jìng)賽，求調(diào)劑B區(qū)211
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】
已經(jīng)有6人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 書畫江湖 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 290分材料工程085601求調(diào)劑 數(shù)二英一 +9 | llx0610 2026-03-02 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 化學(xué)專業(yè)調(diào)劑 +5 | 好好好1233 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 08工科求調(diào)劑 +3 | 隆LLL 2026-03-06 | 4/200 |
|
|
[考研] 085602高分子方向求調(diào)劑 +7 | tlgudy 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +3 | 看看我. 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085602 293分求調(diào)劑 +3 | SivanNano. 2026-03-05 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 267調(diào)劑求助 +5 | 聰少OZ 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑院校 +6 | 云朵452 2026-03-02 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 材料復(fù)試調(diào)劑 +7 | 學(xué)材料的點(diǎn) 2026-03-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
 一志愿中南大學(xué)理學(xué)化學(xué)
+6
|
15779376950 2026-03-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿314求調(diào)劑 +7 | 202111120625 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +8 | 醋精華了一下發(fā)?/a> 2026-03-03 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0856材料工程，初試313調(diào)劑 +7 | 賣個(gè)關(guān)子吧 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +3 | sgbl 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 課題組接收材料類調(diào)劑研究生 +6 | gaoxiaoniuma 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +3 | 少71.8 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑 +10 | 劉夢(mèng)微 2026-02-28 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | repeatt?t 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 成果系統(tǒng)訪問量大，請(qǐng)一小時(shí)后再嘗試。---NSFC啥時(shí)候好哦，已經(jīng)兩天這樣了 +4 | NSFC2026我來了 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856材料求調(diào)劑 +4 | 麻辣魷魚 2026-02-28 | 4/200 |
|