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怎樣做好siRNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)？
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1.純化siRNA siRNA的濃度和純度對(duì)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)非常重要。為得到高純度的siRNA，推薦用玻璃纖維結(jié)合，洗脫或通過15-20%丙烯酰胺膠除去反應(yīng)中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和鹽離子。注意：化學(xué)合成的RNA通常需要跑膠電泳純化（即PAGE膠純化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶將導(dǎo)致siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)失敗。由于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中RNA酶普遍存在，如皮膚，頭發(fā)，所有徒手接觸過的物品或暴露在空氣中的物品等，因此保證實(shí)驗(yàn)中的每個(gè)環(huán)節(jié)不受RNA酶污染非常重要。 3.健康的細(xì)胞培養(yǎng)物和嚴(yán)格的操作確保轉(zhuǎn)染的重復(fù)性 通常，健康的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較高。此外，較低的傳代數(shù)能確保每次實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞的穩(wěn)定性。為了優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，推薦用50代以下的轉(zhuǎn)染細(xì)胞，否則細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率會(huì)隨時(shí)間明顯下降。 4.選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑 針對(duì)siRNA制備方法以及靶細(xì)胞類型的不同，選擇好的轉(zhuǎn)染試劑和優(yōu)化的操作對(duì)siRNA實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要。如Entranster-R4000，專門針對(duì)siRNA等RNA轉(zhuǎn)染。 |
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