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小寒十三金蟲 (正式寫手)
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[求助]
GAL4 DBD序列咨詢 已有2人參與
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藥物化學(xué)專業(yè)，生物小白一只，最近要做藥化的細(xì)胞活性測(cè)試，但細(xì)胞買不到，需要構(gòu)建質(zhì)粒然后瞬時(shí)轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞里面，所以打算請(qǐng)公司構(gòu)建質(zhì)粒，一個(gè)是表達(dá)質(zhì)粒，一個(gè)是報(bào)告質(zhì)粒。 文獻(xiàn)上關(guān)于構(gòu)建報(bào)告質(zhì)粒的描述是由 Invitrogen 公司合成約 130 個(gè)核苷酸 GAL4RE 片段的兩條互補(bǔ)單鏈，此GAL4RE 片段含有 5 個(gè)拷貝 GAL4 的 DNA 結(jié)合序列(CGG AGTACTGTCC T)以及 Kpn I 和 Smal I 雙酶切位點(diǎn)。 公司問我GAL4RE的序列是什么。 有人告訴RE應(yīng)該是response element ,指的是DBD區(qū)域 在一篇文獻(xiàn)上看到釀酒酵母GAL4蛋白由881個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，主要包含DNA結(jié)合域與DNA激活域兩部分(Laughon et al.1984；Oshima Yasuji 1982)。DNA結(jié)合域位于蛋白N端的1～65肽段。那是不是說要先查到gal4的全序列，在找到前65個(gè)序列就可以？這種DBD序列是固定的還是會(huì)因?yàn)檩d體質(zhì)粒的不同而稍微不同？因?yàn)�，前面一篇說的約130個(gè)核苷酸，后一篇說的是65個(gè)氨基酸，堿基序列好像不一樣多。 還有這段話“此GAL4RE 片段含有 5 個(gè)拷貝 GAL4 的 DNA 結(jié)合序列(CGG AGTACTGTCC T)”中的堿基序列是指什么？意思是只要這幾個(gè)序列特定，其他的堿基可以隨意添加？ 有哪位可以幫忙解答，萬分感激 |
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