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fengjunchen銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
求幫忙分析分析融合蛋白不表達(dá)的原因 已有1人參與
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我最近在最兩個(gè)蛋白的融合表達(dá)。一個(gè)是40多KD（后稱A），一個(gè)是50多KD（后稱B）。我之前分別做過這兩個(gè)蛋白的表達(dá)，pET Rosetta的表達(dá)體系。 蛋白A在0.05mM的IPTG下就有較高表達(dá)，可溶和包涵體一半一半；蛋白B在1mM IPTG下游較高表達(dá)，幾乎全是可溶的。 現(xiàn)在我把兩個(gè)蛋白融合在了一起，還是在pET里，大概是 his6-B(無TAA)-A 這么個(gè)結(jié)構(gòu)，按序列預(yù)測(cè)大概是95KD，1mM和2mM IPTG下誘導(dǎo)都看不到條帶變化。 而且很惱人的一點(diǎn)是，Rosetta菌本身在大概95KD處有一個(gè)較濃的帶，現(xiàn)在整的我也說不清是沒表達(dá)，還是表達(dá)量太低了被原有的帶直接給蓋住了？這該怎么辦呢？ 看起來像是不表達(dá)，這大概會(huì)是什么原因造成的呢？該嘗試哪些改進(jìn)呢？ |
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3樓2019-01-20 06:05:39
xiao7270
至尊木蟲 (著名寫手)
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2樓2019-01-19 19:57:35
ZUOZUOYa
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- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
4樓2019-02-25 21:08:34
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