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為什么我的細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率低？
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1）優(yōu)化條件：質(zhì)粒不同，所轉(zhuǎn)染的細(xì)胞不同及定量的準(zhǔn)確性等因素會(huì)導(dǎo)致在一些情況下所做的轉(zhuǎn)染不在該優(yōu)化條件內(nèi)。這種情況下需要對(duì)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑的配比進(jìn)行優(yōu)化。另外，可選用更合適的轉(zhuǎn)染試劑，如Entranster試劑。 2）抑制劑：不要在用于制備DNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物的培養(yǎng)基中使用抗生素，EDTA，檸檬酸鹽，磷酸鹽，RPMI，硫酸軟骨素，透明質(zhì)酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。 3） 細(xì)胞狀態(tài)及融合度：長(zhǎng)勢(shì)旺盛的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果更佳，細(xì)胞密度應(yīng)該在轉(zhuǎn)染時(shí)融合度至少70%以上。 4）DNA純度及數(shù)量：確保質(zhì)粒OD值A(chǔ)260/A280 在1.8~2.0之間。DNA量不能太高，單獨(dú)DNA也會(huì)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有一個(gè)基礎(chǔ)的影響。 |
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