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Western-blot化學(xué)發(fā)光(ECL)時(shí)，膠片上條帶很弱怎么辦？
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條帶弱的原因可能有以下幾個(gè)方面： ①. 因?yàn)榈鞍咨蠘恿康突蚰康牡鞍自趤?lái)源組織或細(xì)胞中的表達(dá)量并不豐富造成�？蛇m當(dāng)加大蛋白上樣量，也可通過(guò)提高抗體稀釋度或采用靈敏度更高的發(fā)光底物來(lái)調(diào)整，如Enlight-plus。 ②. 蛋白沒(méi)有充分轉(zhuǎn)移到膜上。轉(zhuǎn)膜后可通過(guò)預(yù)染Marker判斷轉(zhuǎn)膜效率，也可用麗春紅染膜、用考馬斯亮藍(lán)染膠，判斷轉(zhuǎn)膜效率。 ③. 抗體效價(jià)不高，用量不足，孵育時(shí)間太短，或抗體反復(fù)使用保存不當(dāng)而失活�？煽紤]更換效價(jià)更高的抗體，或提高抗體稀釋度，延長(zhǎng)抗體孵育時(shí)間；若懷疑抗體失活，可用斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)確定抗體活性。 ④. 曝光時(shí)間太短。可適當(dāng)延長(zhǎng)曝光時(shí)間。 |
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