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細胞轉染效率低的原因及解決方案 已有1人參與
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細胞轉染是細胞生物學和分子生物學的一種常用的技術手段。而轉染效率低下卻是實驗人員經常遇到的問題，尤其是原代細胞轉染，轉染難度更大�，F(xiàn)分享幾個細胞轉染實驗常見的幾個陷阱，望實驗人員能夠注意。 1.準備不足 做細胞轉染的時候，在開展正式實驗前要多做預試驗，優(yōu)化轉染條件。優(yōu)化轉染條件包括：轉染試劑的用量、DNA密度、細胞密度、試劑和DNA混合孵育時間等等。 2.細胞污染 細胞污染也是造成細胞死亡，轉染效率低下的一大原因。首先，轉染細胞用的質粒必須保證無菌。而現(xiàn)在市場上的一般的質粒提取試劑盒都做不到絕對無菌。分享一個小秘訣：將提完質粒后或者提的最后一步，用75％乙醇沉淀，這樣就除菌了。 3.質粒質量問題 轉染用的質粒首先要保證數(shù)量，一般為2μg以上。質粒純度不夠或者含有細菌LPS或其他對細胞有毒害作用的物質，也會影響轉染效率。這個時候，就應該對質粒進行純化和濃縮。 4.細胞狀態(tài)不好 細胞狀態(tài)不好，會導致轉染效率低下。一般進行轉染的細胞應該處于對數(shù)生長期。如果是貼壁細胞的話，貼壁率應該在70-80%；如果是懸浮細胞的話，應該是6×105個/孔（24孔板），一般是轉染前一天換液，轉染前用無血清培養(yǎng)基或PBS洗細胞一次。 5.轉染試劑問題 脂質體試劑毒性較大，易造成細胞死亡和轉染效率底下�？蛇x擇非脂質體轉染試劑，如Entranster試劑。 |
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2樓2019-01-26 21:52:00
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