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western-blot實驗注意事項
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·濾紙、膠、膜之間的大小，一般是濾紙>=膜>=膠。 ·濾紙、膠、膜之間千萬不能有氣泡，氣泡會造成短路。 ·因為DEPF膜的疏水性，膜必須首先在甲醇中完全浸濕。而且在以后的操作中，膜也必須隨時保持濕潤（干膜法除外）。 ·濾紙可以重復(fù)利用，上層濾紙（靠膜）內(nèi)吸附有很多轉(zhuǎn)移透過的蛋白質(zhì)，所以上下濾紙一定不能弄混，在不能分辨的情況下，可以將靠膠濾紙換新的。 ·轉(zhuǎn)移時間一般為1.5 小時，( 1mA-2mA/cm2，10% gel)，可根據(jù)分子量大小調(diào)整轉(zhuǎn)移時間和電流大小。 ·灌膠時盡量均勻，否則可能會出現(xiàn)氣泡。 ·為避免出現(xiàn)信號低的情況，最好選用高靈敏度的發(fā)光液，如enlight發(fā)光液等。 |
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