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western-blot實(shí)驗(yàn)常見問題及解決方案
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常見問題 解決對(duì)策 兩塊玻璃板之間灌膠，膠總是不平 玻璃沒有洗干凈，應(yīng)該洗得很干凈 過(guò)硫酸銨和TEMED加量相對(duì)較多 加完試劑后應(yīng)搖勻 總是漏膠 避免玻璃邊緣（與膠條接觸處）破損 將兩塊玻璃板擺放對(duì)齊，底部處于同一平面 膜上有明顯氣泡 操作時(shí)將氣泡完全排除 靠膜一側(cè)的濾紙應(yīng)鋪平 特異性低 優(yōu)化一抗 提高一抗和二抗的稀釋度 降低SDS-PAGE中蛋白的上樣量 背景高 優(yōu)化封閉液 優(yōu)化洗滌緩沖液，增加洗滌次數(shù) 減少曝光時(shí)間 信號(hào)低 優(yōu)化一抗 濃縮樣品 選擇更高靈敏度的發(fā)光液，如enlight等。 |
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