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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » pcr跑不出目的條帶
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pcr跑不出目的條帶 已有4人參與
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之前梯度的時候跑出來了想要的條帶，這幾天在同樣的溫度下怎么都跑不出來，只有二聚體，請各位給看一下什么情況，體系是buffer2.5 dntp2.0 mg1.5 cdna1 f1 r1 extaq0.2 ddh2o補齊至25 pcr體系是94三分鐘 94三十秒 ？？？三十秒 72一分半 35個循環(huán) 72七分鐘 四度保存 重新設計的全長引物，之前二聚體都少，現(xiàn)在能看到二聚體，之前也看到過很多條帶，現(xiàn)在條帶跑不出來了，只能出來二聚體 @biostar2009 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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淵博震天
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淵博震天: 金幣+5, 鼓勵回帖交流 2019-04-10 08:27:20
淵博震天: 金幣+5, 鼓勵回帖交流 2019-04-10 08:27:20
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一般來說跑梯度用mix跑的，模板用菌液、質粒、基因組DNA都可以，濃度要求不高，但確定溫度后就用Extaq、pfu，尤其是pfu對模板的濃度要求很高，濃度高于20ng/ul就擴不出來了。不知你是不是遇到這種情況 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2019-04-09 22:41:11
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