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拜托大佬們了，幫我看看我的條帶為什么跑成啞鈴狀，謝謝謝謝！
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各位老師們。我最近幾個月WB條帶一直跑的很難看，見下圖。每個泳道的條帶都是啞鈴狀，兩端信號很濃呈黑點(diǎn)，中間信號特別淡。我的目的條帶70，其他分子量的蛋白（10~100）我跑下來也是這樣，只不過沒有這么明顯（蛋白信號強(qiáng)的條帶就好很多不太看得出來）。問了老板和師兄師姐。還是沒有找到原因。 我每次轉(zhuǎn)膜液、電泳液都是新配的，我們用millipore的PVDF膜。試了8%、10%、12%的膠都是這樣 最開始我想是不是我蛋白和loading沒有混好，然后煮的時候特別注意混勻了，還是這樣。 然后考慮是不是膠現(xiàn)用現(xiàn)配的原因，所以我最近一次是配了之后過夜再跑的，還是這樣。 有師兄說是膠沒配好，可我不知道哪里沒配好。。。我感覺這個坎過不去了 論壇里的各位老師們同道們，能幫我找下原因嗎？拜托拜托了 WB 問題.png WB 問題2.png |
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我來反饋啦，按之前大佬們說的，1）沖洗膠孔，我就用洗瓶對準(zhǔn)膠孔，或者用槍頭伸進(jìn)孔里吹打；2）再然后配膠混勻的時候不再vortex, 而是再50mL離心管里面迅速配好之后，上下顛倒，避免劇烈搖晃起泡；3）煮蛋白的時候，loding和蛋白混勻再煮，煮完蛋白上樣前一定離心，槍頭吸樣的時候從側(cè)邊吸，避免真有沉淀被進(jìn)樣。其它操作我和之前一樣。現(xiàn)在跑膠 的啞鈴形條帶改善了非常多，基本沒有了。還有就是，10孔跑的條帶的確比15孔好看。 電泳形狀之前沒注意，現(xiàn)在到都是齊的 ps: 怎么傳圖回帖:想放現(xiàn)在的圖上來對比 |
8樓2021-05-30 11:48:25
junjieshao
禁蟲 (小有名氣)
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
2樓2020-09-11 04:06:46
3樓2020-09-12 11:41:33
tanguangguo
木蟲 (正式寫手)
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- 紅花: 3
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- 蟲號: 486368
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- 專業(yè): 中藥質(zhì)量評價
4樓2020-09-22 16:17:56
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