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三只0小豬仔新蟲 (初入文壇)
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[求助]
目的基因連接T載體 菌落pcr沒有目的條帶 已有3人參與
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我PCR產(chǎn)物連接T載體，做藍(lán)白斑篩選，都是白斑，挑但菌落，做菌落pcr，沒有目的條帶，難道都是假陽(yáng)性嗎？我菌落pcr引物跟目的基因一樣 求指教 @飛約瘋?cè)嗽?/u> 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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如果在你的感受態(tài)下空載體確定會(huì)顯藍(lán)斑而且沒有涂錯(cuò)板子的話，建議先在基因插入位點(diǎn)前后100bp左右找兩條引物合一下，畢竟這個(gè)載體以后可能還會(huì)再用的嘛。這個(gè)基因引物如果也沒有條帶就可以盲送試一下，如果擴(kuò)出來(lái)是空載大小就要重做，建議首尾加重組臂做重組，效率會(huì)很高，平連效率還挺低的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
三只0小豬仔
7樓2019-06-03 08:45:41
花鳥畫夜
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2樓2019-06-02 15:51:44
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你的pcr引物跟目的基因一樣是無(wú)法從pcr來(lái)斷定是否為假陽(yáng)性的，推薦用載體上的插入位點(diǎn)前后一段200-300bp的基因做引物，這樣可以判斷是否為假陽(yáng)性。然后藍(lán)白斑篩選其實(shí)有一些感受態(tài)有表達(dá)缺陷，比如說(shuō)jm110,在加了顯色劑的平板上也不顯色的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2019-06-02 18:33:35
三只0小豬仔
新蟲 (初入文壇)
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4樓2019-06-03 07:31:58
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