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油條vs豆?jié){新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
金納米棒修飾DNA 已有1人參與
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大家好，我最近嘗試往金納米棒上修飾巰基化DNA，利用的是低pH高鹽法修飾，從紫外上能看到260有明顯的DNA吸收峰，合成之后的產(chǎn)物也非常穩(wěn)定，多次離心都能很好地收集到產(chǎn)物（應(yīng)該不存在DNA脫落等因素）； 但是在嘗試結(jié)合互補(bǔ)鏈DNA的時(shí)候卻一直都不能夠成功（驗(yàn)證方式：1. 紫外看產(chǎn)物260吸收峰無(wú)明顯變化；2.投入與修飾探針等量的互補(bǔ)鏈DNA，在結(jié)合后未發(fā)現(xiàn)上清中DNA含量變少），想請(qǐng)教下大家這是哪方面出問(wèn)題了？ 嘗試過(guò)的影響因素：1、DNA在金納米棒上的修飾比例；2、反應(yīng)的溫度、pH等 |
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油條vs豆?jié){
新蟲(chóng) (小有名氣)
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謝謝建議，你的這種方法我也嘗試過(guò)，但似乎DNA雙鏈在低pH高鹽環(huán)境下容易解鏈，沒(méi)能成功把互補(bǔ)鏈留��；我后續(xù)再?lài)L試下直接修飾吧，就是時(shí)間相對(duì)長(zhǎng)一點(diǎn)。 另外，想和你探討一下關(guān)于這個(gè)DNA鏈的空間位阻影響，這種位阻是不是主要是DNA鏈離金表面太近，如果我把spacer序列長(zhǎng)度加大一點(diǎn)，是不是會(huì)一定程度消除這種影響？其實(shí)我原來(lái)已經(jīng)加了5個(gè)A了，我現(xiàn)在計(jì)劃再加一點(diǎn)，因?yàn)槲业膶?shí)驗(yàn)這個(gè)互補(bǔ)鏈上還需要繼續(xù)加互補(bǔ)鏈，做雜交鏈反應(yīng)形成個(gè)長(zhǎng)鏈聚合物，所以還是優(yōu)先想考慮解決這個(gè)位阻問(wèn)題 |
5樓2020-06-17 10:27:06
supernatural
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