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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 發(fā)酵/表達 » 發(fā)酵液過濾
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abcjlm銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
發(fā)酵液過濾 已有1人參與
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| 使用BL21表達菌株，5L發(fā)酵罐發(fā)酵，離心收集菌體，使用高壓均質機破碎，離心收集上清，但是發(fā)現(xiàn)上清液很難使用0.45um膜過濾，已經使用10000g離心了，細胞碎片已經被離下去了，咋怎么難過濾？是發(fā)酵液菌體死亡的原因，還是均質過程的原因？急急急 |
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abcjlm
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4樓2021-06-16 14:14:59
原海亮
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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不清楚你用0.45μm過濾的目的是什么，我們通常離心收集上清后即可進行下一步的操作。 大腸桿菌發(fā)酵菌體破碎后，上清液看似清亮（有的時候破碎液粘度大，離心分離也很難拿到清亮的上清液），里面除了一部分可溶性蛋白外，還有破壁后大腸桿菌的一些核酸等物質，這些蛋白和核酸使得上清液不像純化水一樣，是具有一定的粘性的，所以在進行膜過濾的時候很難過濾。 如果你的重組蛋白在上清中，又必須經過0.45μm的膜過濾，可以嘗試在膜過濾前對上清液進行低濃度的鹽析處理，比如用硫酸銨沉淀的方法將上清液中一些雜蛋白提前除去一部分，這樣重新離心獲得的上清會比較容易過濾（使用硫酸銨沉淀技術，應該提前進行小試實驗，確定硫酸銨的使用飽和度，避免目標重組蛋白的損失）。 祝好！ |
2樓2021-06-16 13:55:54
原海亮
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3樓2021-06-16 13:58:05
abcjlm
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5樓2021-06-16 14:17:06
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