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三只0小豬仔新蟲 (初入文壇)
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[求助]
目的基因連接T載體 菌落pcr沒(méi)有目的條帶 已有3人參與
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我PCR產(chǎn)物連接T載體，做藍(lán)白斑篩選，都是白斑，挑但菌落，做菌落pcr，沒(méi)有目的條帶，難道都是假陽(yáng)性嗎？我菌落pcr引物跟目的基因一樣 求指教 @飛約瘋?cè)嗽?/u> 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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三只0小豬仔
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 作物分子育種
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那我要重新設(shè)計(jì)引物嗎？還是多挑幾個(gè)菌試一試，是PCR沒(méi)有P出來(lái)嗎？還是根本就沒(méi)有連接上？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2019-06-03 07:31:58
花鳥(niǎo)畫夜
新蟲 (初入文壇)
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2樓2019-06-02 15:51:44
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你的pcr引物跟目的基因一樣是無(wú)法從pcr來(lái)斷定是否為假陽(yáng)性的，推薦用載體上的插入位點(diǎn)前后一段200-300bp的基因做引物，這樣可以判斷是否為假陽(yáng)性。然后藍(lán)白斑篩選其實(shí)有一些感受態(tài)有表達(dá)缺陷，比如說(shuō)jm110,在加了顯色劑的平板上也不顯色的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2019-06-02 18:33:35
xinxiyuzhou
至尊木蟲 (著名寫手)
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5樓2019-06-03 08:02:05
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