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Misterboy鐵蟲 (正式寫手)
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[求助]
電泳拖尾 已有2人參與
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| 用MixTaq酶PCR，跑電泳沒(méi)問(wèn)題,有目標(biāo)產(chǎn)物，用高保真酶PCR后，50uL全部電泳，準(zhǔn)備膠回收純化DNA，可是電泳完了，產(chǎn)物嚴(yán)重拖尾，沒(méi)有清晰的目的條帶，請(qǐng)問(wèn)這是怎么回事？請(qǐng)求大神解答@飛約瘋?cè)嗽?/u>@biostar2009@wizardfan@youlinglyw |
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樓主用的是哪家的高保真酶，退火溫度好高啊，我用takara的高保真酶，一般是55度，最高56，57度 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
Misterboy4樓2019-04-08 15:54:14
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-04-09 22:04:02
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-04-09 22:04:02
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給樓主一些建議吧，不敢說(shuō)一定能解決問(wèn)題。1.更換電泳液 2.調(diào)整PCR體系，高保真酶模板加多了可能出現(xiàn)類似情況 3.可以考慮提高一下退火溫度 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2019-04-08 00:25:25
Misterboy
鐵蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1022.7
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- 在線: 165小時(shí)
- 蟲號(hào): 4094142
- 注冊(cè): 2015-09-22
- 專業(yè): 化學(xué)生物學(xué)與生物有機(jī)化學(xué)
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謝謝答復(fù)，電泳前已經(jīng)更換了TAE，退火溫度已經(jīng)65度了，現(xiàn)在換了一種高保真酶在做，希望能做出來(lái)吧 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2019-04-08 13:06:45
5樓2019-04-08 16:52:19
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