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zhiqiang2013新蟲 (初入文壇)
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[交流]
細(xì)胞培養(yǎng)遇到黑點(diǎn)怎么辦？這里有辦法！ 已有2人參與
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一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則，是否運(yùn)動，是做布朗運(yùn)動還是呈直線型快速移動。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則，做布朗運(yùn)動，黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片(可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的)，也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物。如果黑點(diǎn)大小一致，快速移動，很可能是細(xì)菌污染。 如果細(xì)胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒有任何變化。 那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān) 1.細(xì)胞生長過老，破碎的細(xì)胞殘骸 2.血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果 3.配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長 4.配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格 如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)的產(chǎn)生 掌握細(xì)胞傳代的最佳時機(jī)，不要細(xì)胞長老了再傳代;掌握好消化時間，防止消化過度產(chǎn)生細(xì)胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到最佳;嚴(yán)格控制水質(zhì)和器皿的清潔。 黑點(diǎn)已經(jīng)產(chǎn)生了，如何進(jìn)行處理 如果判定黑點(diǎn)是污染，請及時將細(xì)胞處理后丟棄。其他情況，可參照以下進(jìn)行： 如果是懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞上清慢速離心（500-600rpm/min，5-6min）并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS洗2-3遍，洗的時候，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS，消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1min左右，讓細(xì)胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細(xì)胞，將收集的細(xì)胞懸液慢速離心（500-600rpm/min，5-6min）并更換新的培養(yǎng)瓶，并可以嘗試適當(dāng)增加血清濃度進(jìn)行培養(yǎng)。 上述是上海酶聯(lián)為大家總結(jié)細(xì)胞培養(yǎng)驚現(xiàn)黑點(diǎn)，希望上述方法對細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生黑點(diǎn)同學(xué)有所幫助。如果您有不同的意見，歡迎交流！也祝您實驗越來越成功！ |
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Anson1358
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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3樓2025-02-10 12:59:42
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不一定，黑膠蟲只是細(xì)胞培養(yǎng)污染物的一種可能性，其他可能性還包括： 細(xì)胞碎片: 細(xì)胞凋亡或壞死后會產(chǎn)生細(xì)胞碎片，這些碎片在顯微鏡下可能呈現(xiàn)為黑色小點(diǎn)。 沉淀: 培養(yǎng)基中的某些成分，例如血清蛋白、鹽結(jié)晶等，可能會形成沉淀，在顯微鏡下也可能呈現(xiàn)為黑色顆粒。 細(xì)菌或真菌污染: 一些細(xì)菌或真菌污染也會在顯微鏡下呈現(xiàn)為黑色小點(diǎn)或顆粒狀物質(zhì)。 但是，細(xì)菌和真菌通常會表現(xiàn)出明顯的增殖和擴(kuò)散，并且培養(yǎng)基可能會變渾濁或產(chǎn)生異味。 其他污染物: 例如支原體、病毒等。 如何判斷是否是黑膠蟲？ 黑膠蟲的典型特征是在顯微鏡下呈現(xiàn)為布朗運(yùn)動的黑色小點(diǎn)，大小不一，形態(tài)多樣，有時呈點(diǎn)狀，有時呈桿狀或絲狀。 它們通常會隨著培養(yǎng)時間的延長而增多，并且對細(xì)胞的生長有一定的影響。 |
4樓2025-02-11 17:07:25
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