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駱駝和小丫頭新蟲 (初入文壇)
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[求助]
載體連接轉(zhuǎn)化，單菌落搖不起來，求大神指點(diǎn)！ 已有1人參與
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自己做的載體連接，Pet28a先酶切以后，連接目的片段。轉(zhuǎn)化至DH5α里面，涂LB平板（加卡那霉素），兩天才長出來幾十個小點(diǎn)點(diǎn)，大的菌落不超過10個。 挑取大的單菌落，接種至LB液體培養(yǎng)基里，37℃搖了一夜加一天，培養(yǎng)基還是澄清的。第一次做構(gòu)建載體，懵逼的很，希望大神指點(diǎn)～ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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3樓2019-03-20 14:47:34
2樓2019-03-20 14:45:29
駱駝和小丫頭
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 25.5
- 帖子: 15
- 在線: 1.7小時
- 蟲號: 14359230
- 注冊: 2019-02-25
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
送紅花一朵 |
對的，我搖菌3天長出來OD值不到0.4，拿菌液破碎后為模板，做PCR，然后出現(xiàn)一個條帶為600bp左右，也不是插入的片段長度（插入片段為510bp），正常的話用通用引物p出的條帶應(yīng)該為800—1000bp左右。嚴(yán)重懷疑載體連接失敗，可是失敗了怎么能長出菌呢？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2019-03-22 19:44:16
5樓2019-03-22 20:39:34
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