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請(qǐng)問為什么多糖過DEAE-52不出峰，上樣量250mg，流速為1ml/min，每管接6ml
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下面是幾個(gè)猜想 1、多糖是否完全溶于水，DEAE-52 Cellulose分離純化多糖的原理是酸性多糖倍吸附至陰離子交換柱上，經(jīng)水、鹽溶液洗滌后，因?yàn)檫@些溶劑與DEAE-52 Cellulos結(jié)合更緊密，會(huì)把多糖替換下來，多糖就洗脫下來了，如果不是溶液的話，離子交換的效果不好； 2、多糖在上樣的過程中，就應(yīng)該用離心管盛接，因?yàn)橹行远嗵墙M分無法被吸附，因?yàn)闆]有電荷啊，無法完成與DEAE-52 Cellulos的離子交換，如果你的糖是中性糖，上樣的時(shí)候就直接流下去了； 3、 如果你的糖是酸性糖，是否鹽溶液的濃度足夠大，以至于把酸性多糖洗下來。比如文獻(xiàn)做到1mg/mL的NaCl，我們可以再用1.2mg/mL的NaCl和1.4mg/mL的NaCl再洗滌一下； 4、洗滌液的體積是否足夠，我看的文獻(xiàn)是每個(gè)濃度梯度50mL或者100mL，但是我的樣品必須用超純水、0.1 mol/L NaCl、0.2 mol/L NaCl、0.4 mol/L NaCl、0.8 mol/L NaCl、1.0 mol/L NaCl和1.2 mol/L NaCl溶液各200 mL洗滌、 5、柱子的高度是否合理，如果柱子過高或者體積過大，會(huì)導(dǎo)致樣品很久很久才能遍布整個(gè)柱子填料中，此時(shí)已經(jīng)需要很多溶劑把樣品帶到柱子填料中了，所以還沒有多糖被洗脫下來； 6、濃度梯度最好多設(shè)幾個(gè)，然后把每個(gè)梯度下的洗脫液體積增大些，就能看出來你的多糖主要分布在那個(gè)濃度梯度的洗脫液中了； |
2樓2023-05-19 14:07:14
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請(qǐng)問DEAE-52用之前需要堿酸堿預(yù)處理嗎，我買的那個(gè)填料說明書說直接用緩沖液溶脹就能用了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2023-06-28 12:53:48
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4樓2023-08-16 17:34:17
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