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mchotdogzsj木蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于基因檢測項目設備和實驗條件的求助
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請問以下檢測項目分別需要什么樣的設備、實驗條件又是如何？謝謝啦！ 1. 單核苷酸多肽性（SNP）分型測序； 2. 基因甲基化（Methylation）位點檢測； 3. 毛細管電脈（STR/SSR/AFLP/T-RFLP）基因檢測； 4. CpG甲基化位點定量檢測； 5. 轉(zhuǎn)錄組mRNA水平突變點定量檢測； |
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1. 單核苷酸多肽性（SNP）分型測序： 設備：高通量測序儀（如Illumina HiSeq X Ten、Illumina NovaSeq等）。 實驗條件：需要對DNA樣本進行提取和純化。提取的DNA需要經(jīng)過PCR擴增后，再進行SNP位點的檢測。PCR擴增條件根據(jù)不同的實驗方案可以不同，但對于準確測序而言，一般需要控制模板數(shù)量、引物比例、反應體系組成、PCR產(chǎn)物長度等因素，并進行適當優(yōu)化。測序過程中還需要質(zhì)控樣品、建立文庫、進行高通量測序以及數(shù)據(jù)分析等步驟。 2. 基因甲基化（Methylation）位點檢測： 設備：一般采用芯片（如Illumina HumanMethylation450 BeadChip）或者高通量測序儀。 實驗條件：需要對DNA樣本進行提取和純化。將提取的DNA轉(zhuǎn)化為亞甲基化的狀態(tài)，并使用甲基化特異性酶或芯片等方法來檢測靶向CpG島區(qū)域的甲基化狀態(tài)。在實驗前要注意去除RNA和蛋白質(zhì)的干擾以及控制反應條件等因素。 3. 毛細管電脈（STR/SSR/AFLP/T-RFLP）基因檢測： 設備：毛細管電泳儀、PCR儀、熒光定量PCR儀等。 實驗條件：需要對DNA樣本進行提取和純化。根據(jù)不同的實驗方案，可以采用STR（短串聯(lián)重復序列）、SSR（微衛(wèi)星重復序列）、AFLP（擴增片段長度多態(tài)性）和T-RFLP（限制性片段長度多態(tài)性）等方法進行檢測。檢測過程中需要進行PCR擴增、熒光標記等處理，并通過毛細管電泳進行分析。 4. CpG甲基化位點定量檢測： 設備：一般采用熒光定量PCR儀或者數(shù)字聚合酶鏈式反應(NaPy)技術(shù)。 實驗條件：需要對DNA樣本進行提取、純化并轉(zhuǎn)化為亞甲基化的狀態(tài)。在PCR反應體系中加入特異性引物及探針，利用特異性融合溫度來選擇CpG甲基化位點進行定量檢測。 5. 轉(zhuǎn)錄組mRNA水平突變點定量檢測： 設備：高通量測序儀及其所需的前置設備（如RNA提取儀、RNA質(zhì)量和純度檢測儀器、RNA處理相關(guān)試劑等）。 實驗條件：需要對樣品進行RNA提取和純化。在檢測突變點時，需要對RNA樣本進行轉(zhuǎn)錄、反轉(zhuǎn)錄等處理，并在PCR擴增過程中使用特異性引物和探針來選擇目標基因，并通過高通量測序技術(shù)對其進行測序。在實驗中還需要對數(shù)據(jù)進行質(zhì)控、去除低質(zhì)量序列、比對參考基因組或轉(zhuǎn)錄組的序列等步驟。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2023-04-16 12:58:12
mchotdogzsj
木蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 合成藥物化學
3樓2023-04-17 09:33:07
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