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嗒噠嗒噠新蟲 (初入文壇)
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怎么把四個(gè)目的片段用NEB無縫連接酶連接到一起啊
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最近在做基因定點(diǎn)突變,想用同源重組的方法替換掉目的基因,設(shè)計(jì)了四個(gè)片段,左同源臂,抗性基因,目的片段,右同源臂,以下簡稱ABCD,我把這四段片段都擴(kuò)了出來,但不能將四個(gè)片段用NEB酶連接起來,該怎么辦。壳蟠笊裰附贪 @starseacow 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
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怎么才算合適?我的A、B、D都是1000bp左右,C是2500bp,A、B的濃度是350ng/ul,C、D濃度是150ng/ul左右,A和B初次連接用兩端的引物可以擴(kuò)出來?xiàng)l帶,但是把條帶膠回收當(dāng)模板擴(kuò),只有一條暗的條帶,反而單獨(dú)的A、B條帶變亮了,C和D試了幾次,都連不上 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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