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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 蛋白電泳/WB » SDS-PAGE電泳法，marker缺最大的兩條帶可能的原因？

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【懸賞金幣】回答本帖問題，作者moyunzhi將贈送您 5 個金幣
moyunzhi 銅蟲 (小有名氣) 應助: 0 (幼兒園) 金幣: 82 帖子: 59 在線: 18.9小時 蟲號: 2639374 注冊: 2013-09-06 專業(yè): 植物生理與生化	[求助] SDS-PAGE電泳法，marker缺最大的兩條帶可能的原因？ 已有1人參與 最近遇到很神奇的一個問題： 我在跑SDS-PAGE電泳時，marker一共8條帶，但時跑出來時只有6條帶，最大的兩條帶沒有。 于是我購買了 制膠的kit，用kit制膠跑出來的也是6條帶。 然后我就把同一管marker送到別的實驗室?guī)兔σ才芰艘幌拢�奇跡似乎出現了，別的實驗室就能把 marker的完整條帶都跑出來。 現在是在時懵的不行。難道時我人出了問題？ 求各位有經驗的大佬指點一下。感激！感激！感激！ （小木蟲上傳圖片怎么回事？上傳不了？一上傳就卡死了。給不了圖片啊，傷心，傷心。） 回復此樓 » 猜你喜歡 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 已經有4人回復 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 已經有3人回復 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 已經有3人回復 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 已經有3人回復 一志愿山東大學105500藥學專碩，總分302求調劑 已經有9人回復 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 已經有5人回復 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 已經有5人回復 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 已經有5人回復 售瀆SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。備注【⊙=0】 已經有7人回復 276求調劑 本科天津工業(yè)大學 一志愿北京化工大學0855 已經有6人回復
1樓 2022-09-05 09:15:57	已閱   回復此樓   關注TA 給TA發(fā)消息 送TA紅花 TA的回帖
小鳥游佑太 新蟲 (初入文壇) 應助: 1 (幼兒園) 金幣: 43 帖子: 22 在線: 4.5小時 蟲號: 5364684 注冊: 2016-12-17 專業(yè): 生物物理、生物化學與分子	【答案】應助回帖 感謝參與，應助指數 +1 根據你的描述，marker本身是沒有問題的，問題應該就出現在凝膠或者電泳上面。 至于在何種情況下，大分子量蛋白無法被分離出，我個人認為有兩點： 1、電泳未結束，溴酚藍帶需要跑到凝膠底部 2、凝膠濃度選擇不合適，應在你用的凝膠濃度基礎上，濃度要低一些 贊一下(1人) 回復此樓 高級回復
2樓2022-09-06 09:26:31	已閱   回復此樓   關注TA 給TA發(fā)消息 送TA紅花 TA的回帖
moyunzhi 銅蟲 (小有名氣) 應助: 0 (幼兒園) 金幣: 82 帖子: 59 在線: 18.9小時 蟲號: 2639374 注冊: 2013-09-06 專業(yè): 植物生理與生化	引用回帖: 2樓: Originally posted by 小鳥游佑太 at 2022-09-06 09:26:31 根據你的描述，marker本身是沒有問題的，問題應該就出現在凝膠或者電泳上面。 至于在何種情況下，大分子量蛋白無法被分離出，我個人認為有兩點： 1、電泳未結束，溴酚藍帶需要跑到凝膠底部 2、凝膠濃度選擇不合適 ... 感謝您的幫助，我可能還需要補充一下我跑膠時遇到的問題：1.我請別的實驗室?guī)兔ε苣z時是都是用的12%的分離膠，4%的濃縮膠；2.我跑濃縮膠時，電泳內槽buffer漏到外槽，我就補了buffer,但奇怪的是跑分離膠時，就不漏了。內槽液面液穩(wěn)定。 不知道是不是這個“漏液”導致的結果？但是為啥跑到分離膠時又不漏液了呢？就很奇怪。百思不得其解。 贊一下 回復此樓
3樓2022-09-07 08:52:02	已閱   回復此樓   關注TA 給TA發(fā)消息 送TA紅花 TA的回帖
小鳥游佑太 新蟲 (初入文壇) 應助: 1 (幼兒園) 金幣: 43 帖子: 22 在線: 4.5小時 蟲號: 5364684 注冊: 2016-12-17 專業(yè): 生物物理、生物化學與分子	【答案】應助回帖 引用回帖: 3樓: Originally posted by moyunzhi at 2022-09-07 08:52:02 感謝您的幫助，我可能還需要補充一下我跑膠時遇到的問題：1.我請別的實驗室?guī)兔ε苣z時是都是用的12%的分離膠，4%的濃縮膠；2.我跑濃縮膠時，電泳內槽buffer漏到外槽，我就補了buffer,但奇怪的是跑分離膠時，就不漏 ... 根據你的描述，如果你不是后來把內外槽的buffer液面補充到相同高度，我做一個猜想，濃縮膠漏液，而分離膠不漏液，這個說明，漏液問題應該不是膠板裝夾問題導致的，應該是從膠板內漏出去的，可能是濃縮膠一開始和玻板之間有縫隙，在之后，凝膠不斷吸水膨脹，使得凝膠與板子貼合更緊密，因此，后面就不漏液了，從這個猜想去分析大分子蛋白消失的問題，可能是大蛋白在后面因為凝膠和膠板的縫隙跑丟了。        解決方法：為了解決玻璃板和凝膠的縫隙問題，需要注意幾點，1、凝膠配置好需要立即使用，防止凝膠干縮；2、玻璃板需要清洗干凈，不能有任何污漬；3、凝膠的速凝劑比例要選擇合適 贊一下(1人) 回復此樓
4樓2022-09-07 11:05:44	已閱   回復此樓   關注TA 給TA發(fā)消息 送TA紅花 TA的回帖
moyunzhi 銅蟲 (小有名氣) 應助: 0 (幼兒園) 金幣: 82 帖子: 59 在線: 18.9小時 蟲號: 2639374 注冊: 2013-09-06 專業(yè): 植物生理與生化	引用回帖: 4樓: Originally posted by 小鳥游佑太 at 2022-09-07 11:05:44 根據你的描述，如果你不是后來把內外槽的buffer液面補充到相同高度，我做一個猜想，濃縮膠漏液，而分離膠不漏液，這個說明，漏液問題應該不是膠板裝夾問題導致的，應該是從膠板內漏出去的，可能是濃縮膠一開始和玻 ... 謝謝您的幫助，我后來把膠提前放水里泡了一會兒，還是有點漏，反正就是反復弄，終于沒有怎么漏了，膠的濃度我也降到了10%，今天跑了一下，marker的第二條大帶也看見了，但是最大的那條沒有看見，考染明天看結果如何。 非常感謝！ 贊一下 回復此樓
5樓2022-09-08 21:34:52	已閱   回復此樓   關注TA 給TA發(fā)消息 送TA紅花 TA的回帖

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