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海韻楠馨新蟲 (小有名氣)
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[求助]
DNS試劑測(cè)定α-淀粉酶抑制劑活性
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大家好,本人想測(cè)定某種物質(zhì)對(duì)α-淀粉酶的抑制作用。采用的是DNS法測(cè)定產(chǎn)物糖的方法。 我是自己提取天然產(chǎn)物,然后買淀粉酶,測(cè)定天然產(chǎn)物對(duì)淀粉酶的抑制作用。 根據(jù)文獻(xiàn)的步驟修改:精確吸取 0. 1mL的樣品 和 0. 1mL 5U/mL的α-淀粉酶溶液(用濃度與樣品與對(duì)照品區(qū)分不開(kāi)),充分混勻,在 37℃下反應(yīng)10 min,然后加入0.1mL 1%可溶性淀粉液,在 37 ℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng) 5 min。再加入 0.2mL DNS 顯色劑,在沸水浴中反應(yīng) 3 min,之后立即用流動(dòng)自來(lái)水冷卻 (終止反應(yīng)),用PBS稀釋10倍在 540 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸收度,記為 OD。 樣品用2%DMSO*PBS配置、1%可溶性淀粉液及酶液都是用PBS配置的。3,5-二硝基水楊酸(DNS)溶液從試劑公司購(gòu)買。 但是根據(jù)這個(gè)步驟做出來(lái),樣品組(樣品+α-淀粉酶溶液),空白對(duì)照組(用2%DMSO*PBS代替樣品,其他同上),陰性組(用PBS代替酶,其他與樣品/空白組一致)煮沸6分鐘后,紅棕色顏色很深,PBS稀釋減去陰性對(duì)照OD后,樣品濃度梯度小時(shí),樣品組OD值與空白組OD值幾乎差不多,樣品吸光度參差不齊,無(wú)趨勢(shì),有幾次做還會(huì)比空白組高。濃度梯度大時(shí),有效果趨勢(shì)。 求大神幫忙,我是試了好多還不出滿意結(jié)果,希望各位大神提供幫助,謝謝!@lifeliuyan |
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