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YJX009863新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
DNS試劑測(cè)定α-淀粉酶抑制劑活性 已有1人參與
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大家好,本人想測(cè)定某種物質(zhì)對(duì)α-淀粉酶的抑制作用。采用的是DNS法測(cè)定產(chǎn)物糖的方法。 我是自己提取天然產(chǎn)物,然后買(mǎi)淀粉酶,測(cè)定天然產(chǎn)物對(duì)淀粉酶的抑制作用。 根據(jù)文獻(xiàn)的步驟:精確吸取 0. 25mL的樣品 和 0. 25 mL 2mg/mL的α-淀粉酶溶液,充分混勻,在 37℃水浴中反應(yīng)10 min,然后加入0.5mL 2%可溶性淀粉液,在 37 ℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng) 5 min。再加入 0.5mL DNS 顯色劑,在沸水浴中反應(yīng) 6 min,之后立即用流動(dòng)自來(lái)水冷卻 (終止反應(yīng)),用PBS稀釋10倍在 540 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸收度,記為 OD。 樣品、2%可溶性淀粉液及酶液都是用PBS配置的。3,5-二硝基水楊酸(DNS)溶液配置:精確稱(chēng)取 6.3 g DNS和 262 m L 2 mol.L-1的氫氧化鈉溶液,加入含有 182 g 酒石酸鉀鈉的 500 m L 溫度為 50℃左右的熱水溶液中,再加入結(jié)晶苯酚 5 g,亞硫酸鈉 5 g,充分溶解,冷卻至常溫后加水定容到 1 L,貯存于棕色瓶中,即成 DNS 溶液,室溫下放置 7 d 后使用。 但是根據(jù)這個(gè)步驟做出來(lái),樣品組(樣品+α-淀粉酶溶液),空白對(duì)照組(用pbs代替樣品,其他同上),煮沸6分鐘后,紅棕色顏色很深,PBS稀釋后,樣品組OD值與空白組OD值幾乎差不多,有幾次做還會(huì)比空白組高。還不知道是什么原因? 求大神幫忙,我是試了好多還不出滿意結(jié)果,感覺(jué)奔潰了!謝謝 |
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[論文投稿]
求助coordination chemistry reviews 的寫(xiě)作模板
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ljplijiapeng 2026-02-27 | 4/200 |
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