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Misterboy鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
電泳拖尾 已有2人參與
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| 用MixTaq酶PCR，跑電泳沒(méi)問(wèn)題,有目標(biāo)產(chǎn)物，用高保真酶PCR后，50uL全部電泳，準(zhǔn)備膠回收純化DNA，可是電泳完了，產(chǎn)物嚴(yán)重拖尾，沒(méi)有清晰的目的條帶，請(qǐng)問(wèn)這是怎么回事？請(qǐng)求大神解答@飛約瘋?cè)嗽?/u>@biostar2009@wizardfan@youlinglyw |
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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-04-09 22:04:02
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給樓主一些建議吧，不敢說(shuō)一定能解決問(wèn)題。1.更換電泳液 2.調(diào)整PCR體系，高保真酶模板加多了可能出現(xiàn)類(lèi)似情況 3.可以考慮提高一下退火溫度 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
2樓2019-04-08 00:25:25
Misterboy
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謝謝答復(fù)，電泳前已經(jīng)更換了TAE，退火溫度已經(jīng)65度了，現(xiàn)在換了一種高保真酶在做，希望能做出來(lái)吧 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
3樓2019-04-08 13:06:45
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樓主用的是哪家的高保真酶，退火溫度好高啊，我用takara的高保真酶，一般是55度，最高56，57度 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
Misterboy4樓2019-04-08 15:54:14
5樓2019-04-08 16:52:19
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6樓2019-04-09 09:10:20
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7樓2019-04-09 09:12:01
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8樓2019-04-09 23:28:01
厚德求是
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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沒(méi)P出來(lái)，做一個(gè)退火溫度梯度吧。55-65做八個(gè)，看哪一個(gè)能P出來(lái)，如果還不行，重新設(shè)計(jì)引物，換思路吧。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
9樓2019-04-10 13:43:55
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