 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 2/1 | 返回列表 |
| 查看: 4033 | 回復: 18 | |||||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||||
fast-rui新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
異源表達蛋白遇到問題 已有8人參與
|
||||
|
本人最近在做異源表達，用的pet28a表達載體，宿主菌是BL21，od搖到0.6-0.8，16℃誘導19h，做了幾次蛋白大部分都在包涵體中，iptg濃度試過0.1-0.8mM的。這次打算試試培養(yǎng)基多調(diào)幾個ph試試。 但是想問就是我的蛋白等電點是6.74，LB的ph會影響表達嗎？破碎的時候蛋白裂解液的ph設(shè)為多少比較合適？有沒有大神可以給我點建議，看看能不能把包涵體減少。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
回復此樓» 猜你喜歡
環(huán)境工程專碩307 一志愿211 四六級已過 求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
-
282求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復
-
0855機械工程324求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
材料復試調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復
-
080500材料科學與工程
已經(jīng)有7人回復
-
學碩材料275調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復
-
274求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
307求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
085600材料調(diào)劑 總分330
已經(jīng)有3人回復
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
專家經(jīng)驗: +248 - BioEPI: 73
- 應助: 257 (大學生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19428.4
- 散金: 1704
- 紅花: 121
- 帖子: 6582
- 在線: 2774.9小時
- 蟲號: 856414
- 注冊: 2009-09-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
- 管轄: 微生物
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
|
對于在溫度稍高容易形成包涵體的蛋白質(zhì)，搖到od以后要等菌液冷卻一點再加iptg，因為包涵體的形成有可能形成慣性，一旦開始形成，扭轉(zhuǎn)需要時間。如果不容易形成包涵體的蛋白質(zhì)，不必降溫再誘導。 用BL21容易形成包涵體，用大腸桿菌的其它菌株只能是改善，不會根治，因為同一個物種的折疊系統(tǒng)大同小異。換宿主可能要換物種。 加一段融合蛋白質(zhì)可能改善但不一定根治，而且不能確定會不會對蛋白質(zhì)的本身性質(zhì)有改變。具體要什么樣的性質(zhì)或可以接受什么樣的性質(zhì)，問你導師。 復性不一定可行，因為不一定能完全復性，而且即使部分復性形成可溶蛋白質(zhì)，其性質(zhì)也不一定與正確折疊得到的蛋白質(zhì)性質(zhì)一致。具體要什么樣的性質(zhì)或可以接受什么樣的性質(zhì)，問你導師。 你把長得快的菌液拿出來放在室溫下短時間不會影響菌體狀態(tài)，最多就是因為接觸氧氣不足造成生長緩慢。要是你擔心，就放在溫度稍低的搖床繼續(xù)搖，大腸桿菌在28度的生長溫度約為37度下八分之一。 要是還有能夠維持更低溫度的搖床，就繼續(xù)降低溫度。大腸桿菌在iptg存在時不會完全停止生長，但在這么低的溫度下就更慢。OD600為1.5時誘導，10度。 很低溫度時，搖床壓力大，或直接走極端，放在4度冰箱時不時拿起來搖一搖。 |
15樓2019-06-14 00:40:45
2樓2019-06-11 21:03:08
3樓2019-06-11 22:22:47
fast-rui
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 279.8
- 帖子: 78
- 在線: 5.3小時
- 蟲號: 10135223
- 注冊: 2018-09-03
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
4樓2019-06-11 22:44:34
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學 一志愿東北大學 279分求調(diào)劑 +4 | 聶樂平 2026-03-03 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
085600 英一數(shù)二272求調(diào)劑
 5+6
|
vida_a 2026-03-01 | 47/2350 |
|
|
|
[考研] 中國科學技術(shù)大學材料與化工281求調(diào)劑，有科研和獲獎經(jīng)歷 +9 | wsxw 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085600求調(diào)劑 +4 | LRZZZZZZ 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +7 | 26調(diào)劑 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +4 | 是樂渝哇 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +4 | Afy123456 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 280分 +10 | yyqqhh 2026-03-03 | 10/500 |
|
|
|
[基金申請] 沒有青基直接申請面上，感覺自己瘋了 +5 | kevin63t 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 計算機學碩 分數(shù)285求調(diào)劑
+4
|
glwshine 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿]
通訊作者寫誰，問題是你意想不到的問題
15+3
|
阿爾法啊 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 清華大學 材料與化工 353分求調(diào)劑 +5 | awaystay 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0856材料調(diào)劑 +5 | 沿岸有貝殼OUC 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 博士自薦 +4 | kkluvs 2026-02-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +5 | 2026計算機_誠心 2026-03-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +4 | 巴拉巴拉根556 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請] 成果系統(tǒng)訪問量大，請一小時后再嘗試。---NSFC啥時候好哦，已經(jīng)兩天這樣了 +4 | NSFC2026我來了 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +6 | 田智友 2026-02-28 | 6/300 |
|
|
|
[論文投稿]
求助coordination chemistry reviews 的寫作模板
10+3
|
ljplijiapeng 2026-02-27 | 4/200 |
|
|
|
[論文投稿]
Optics letters投稿被拒求助
30+3
|
luckyry 2026-02-26 | 4/200 |
|