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yedansky新蟲 (著名寫手)
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[交流]
蛋白可溶性表達(dá) 無活性
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有沒有可能 大腸桿菌在OD600 0.4-0.6 誘導(dǎo)時，少量表達(dá)的可溶性蛋白 有很高的活性 但OD600 值在0.7-0.8或者更高，雖然為可溶性表達(dá)，但是無活性，有人有這種情況么 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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yedansky
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一個萜環(huán)化酶 pet28a載體，第一次實(shí)驗蛋白表達(dá)量很少，但活性很強(qiáng) 而且和我預(yù)期產(chǎn)物一樣，但是后面再重復(fù)就無活性 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
12樓2020-01-17 12:03:48
旭日讀書
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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2樓2020-01-10 16:01:09
zsygxh
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+5, 鼓勵熱心回帖交流 2020-01-18 20:28:23
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+5, 鼓勵熱心回帖交流 2020-01-18 20:28:23
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關(guān)系應(yīng)該不大。 1. 首先蛋白可溶并不代表蛋白處于天然結(jié)構(gòu)，它可以是可溶性多聚體，也可以是多種結(jié)構(gòu)的混合物，雖然沒有沉淀，但有可能活性位點(diǎn)被包埋或活性位點(diǎn)的氨基酸側(cè)鏈空間位置變化而沒有活性，這跟蛋白性質(zhì)有關(guān)，所以即使可溶活性也可能很低甚至無活性。 2. 蛋白可能存在必要的修飾才有活性，原核表達(dá)系統(tǒng)無法完成，查文獻(xiàn)自行確認(rèn)。 3. 缺乏輔因子，查文獻(xiàn)自行確認(rèn)。 建議純化以后跑一下HPLC，先確認(rèn)樣品是否為單一結(jié)構(gòu)。另外，確認(rèn)一下序列里有沒有cys，如果有確認(rèn)cys是形成二硫鍵還是參與金屬離子配位的，如果沒有嘗試融合不同標(biāo)簽表達(dá)。 總之，優(yōu)先嘗試通過可溶表達(dá)獲得天然構(gòu)象的蛋白，不行嘗試復(fù)性。 |
3樓2020-01-10 17:09:02
匿名
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4樓2020-01-10 19:41:40
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