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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 蛋白可溶性表達 無活性
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yedansky新蟲 (著名寫手)
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[交流]
蛋白可溶性表達 無活性
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有沒有可能 大腸桿菌在OD600 0.4-0.6 誘導時，少量表達的可溶性蛋白 有很高的活性 但OD600 值在0.7-0.8或者更高，雖然為可溶性表達，但是無活性，有人有這種情況么 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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11樓2020-01-17 11:13:08
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2樓2020-01-10 16:01:09
zsygxh
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關系應該不大。 1. 首先蛋白可溶并不代表蛋白處于天然結構，它可以是可溶性多聚體，也可以是多種結構的混合物，雖然沒有沉淀，但有可能活性位點被包埋或活性位點的氨基酸側鏈空間位置變化而沒有活性，這跟蛋白性質有關，所以即使可溶活性也可能很低甚至無活性。 2. 蛋白可能存在必要的修飾才有活性，原核表達系統(tǒng)無法完成，查文獻自行確認。 3. 缺乏輔因子，查文獻自行確認。 建議純化以后跑一下HPLC，先確認樣品是否為單一結構。另外，確認一下序列里有沒有cys，如果有確認cys是形成二硫鍵還是參與金屬離子配位的，如果沒有嘗試融合不同標簽表達。 總之，優(yōu)先嘗試通過可溶表達獲得天然構象的蛋白，不行嘗試復性。 |
3樓2020-01-10 17:09:02
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