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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » 關于無縫克隆的問題
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[交流]
關于無縫克隆的問題 已有9人參與
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嗯本人研一實驗室小白一枚，因為是新建立的實驗室，也木的師兄師姐帶，所以來這里求助一下，順便分享下我的經驗 老師讓我把一個13000的基因搞到手 我搞了八個月了，先是分成七段，拿提的cdna當模板p，這些都是小事，后來的拼接最開始用的圣羽的，挺得勁把2+3連起來了，再后來就死活做不出來，做了各種對照，覺得是試劑盒的問題，就換了諾唯贊的，后來就把2+3 4+5 6+7都連起來了，然后連2+3+4+5用的感受態(tài)還是自己實驗室做的dh5，挑菌用第三段尾端設計了個引物，第四段開始設計了個引物，跑出來500bp的帶，也挑出來了。接下來就是1+2+3連起來，然后用當時2+3+4+5連接時的同源臂，順利的把1+2+3+4+5連起來了，測序也對了。 現(xiàn)在的問題是我用諾唯贊的試劑盒死活做不出來了，簡單的4+5+6+7都連不起來，同樣的手法，操作，感受態(tài)換成了買的也是不行，一個多月了，本來已經想好方法只要把4567連上，我就有能力把1234567連上，但是現(xiàn)在做不出來，誰最近做過無縫克隆，有推薦的做出來的試劑盒沒？neb的就算了，也買了做不出來。我可以分享我目前的經驗。 目前就是9200片段+5000pcdna3.1測序正確 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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9樓2019-09-19 10:06:18
金平果
新蟲 (著名寫手)
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- 蟲號: 6557232
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- 專業(yè): 生物化學
2樓2019-08-14 23:07:17
wuhu0612331
銅蟲 (正式寫手)
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- 蟲號: 3232337
- 注冊: 2014-05-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 免疫生物學
3樓2019-08-15 09:32:17
4樓2019-08-15 09:59:15
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