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draxlx新蟲 (小有名氣)
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[求助]
構建且成功表達過的重組質粒 復測數(shù)據時不表達了 已有1人參與
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各位大佬，誠心求助。 4月份的時候，我用無縫克隆技術構建了一個 "目的基因+耐熱基因+表達載體" 的重組質粒 ，成功表達了“目的基因+耐熱基因”的融合蛋白，測其酶學特性顯示 ：融合蛋白比野生酶在溫度穩(wěn)定性方面有了極大改善。 現(xiàn)在7月份，我用當初保藏的菌種 再次擴培、破胞、純化，復測其溫度穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)與野生酶一樣，重復不出當初的數(shù)據。 跑過菌液電泳，確實是重組質粒的菌液沒有拿錯。 又跑了蛋白膠，結果沒有融合蛋白的表達條帶，反而有野生酶的表達條帶。（怪不得復測的時候，融合蛋白與野生酶的數(shù)據幾乎一模一樣，差別十分微�。� 有沒有朋友出現(xiàn)過這種情況啊？ （4月份所測的數(shù)據是沒有錯的，因為當時短時間內有3個人都測了，三個人測出來的數(shù)據是高度統(tǒng)一的。） |
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draxlx
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draxlx
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5樓2022-07-31 13:42:25
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