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食品考研!新蟲 (小有名氣)
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[求助]
大腸桿菌轉化提質(zhì)粒PCR有條帶,酶切無條帶 已有1人參與
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pet28a為載體,連接目的基因(為了對比做了兩個公司的連接酶)導入大腸桿菌DH5α,挑取平板長的單菌落(平板抗性沒問題),過夜搖菌提質(zhì)粒,提的質(zhì)粒做模板PCR驗證和酶切驗證,結果是PCR有目的條帶,但是酶切幾乎都沒有目的條帶,偶爾十分之一的概率可能會出現(xiàn)一個有目的條帶的,請問這是咋回事呢(兩個公司的酶做出來都是這樣子的)? 是假陽性太多了嗎,怎么避免呢?? |
金蟲 (小有名氣)
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