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Milkttttea新蟲 (初入文壇)
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酶切完連接構(gòu)建載體一直不成功
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切入DNA片段1385bp，載體4729bp 跑膠看亮度，片段大概10ng/ul，載體大概40ng/ul 片段加了15ul，載體2ul，buffer2ul，T4連接酶1ul，摩爾比大概1:6.5。 為什么一直連接不上呢？amp板上一個(gè)單克隆都沒有 卡在這個(gè)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)一個(gè)月多了真的頭禿了！ 求幫助！ @youlinglyw @biostar2009 @飛約瘋?cè)嗽?/u> @wizardfan 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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030Selma
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3樓2022-08-07 15:13:27
烏克蘭跑男
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2樓2022-08-07 14:16:39
Milkttttea
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昨天又做了兩板，載體53.2ng/ul，片段15.7ng/ul，儀器測得濃度，OD260/280都有1.8。1:3比例做了10體系，1:7做了20體系，都沒有長單克隆，我真的好迷茫啊，到底問題出在哪里了 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2022-08-10 09:37:02
Milkttttea
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剛買了維諾贊的無縫克隆，我看了一下說明書，說同源臂最好40-60GC，但是我看我有一個(gè)酶切位點(diǎn)怎樣最低都要62%，這樣影響大嗎？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2022-08-10 17:39:42
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