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擬南芥i鐵蟲 (初入文壇)
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[交流]
救救孩子，PCR做了半年了沒結(jié)果 已有7人參與
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我首先提取螨蟲體的基因組DNA，特異性擴增螨蟲基因組中一段穩(wěn)定遺傳且保守的序列ITS2，擴增之后送PCR產(chǎn)物測序，然后比對測序結(jié)果得到相似度（大于90%），以這種方法來檢定蟲種的純度。 我有400個蟲體樣本需要檢定，每次檢定到100多個蟲種時，擴增的條帶會出現(xiàn)引物二聚體，然后引物二聚體越來越嚴(yán)重，最后目的條帶消失，出現(xiàn)涂抹帶現(xiàn)象。本來認(rèn)為是引物降解的原因，我合成了新的引物，也沒有用。提取DNA我們使用的是索萊寶的動物基因組提取試劑盒，由于螨蟲極小，所以提取的濃度只有不到3ng/μl，嘗試了其他的提取方式但是都沒有解決。但是在實驗的前100蟲體都很順利，之后條帶就逐漸消失。最后我直接重新設(shè)計了引物，擴增出來的條帶及其明亮單一，用以前做不出來的DNA作為模板也是單一明亮的條帶。由于重新設(shè)計了引物所以400個樣本的檢定又要重新開始，奇怪的地方又出現(xiàn)了，檢定了一部分時之后又出現(xiàn)了同樣的問題。之后我又設(shè)計了第三對引物，檢定了一部分時之后同樣的問題又出現(xiàn)了。 總之只要我重新設(shè)計引物擴增條帶就很好，但是使用一段時間后就不穩(wěn)定了。就算重新合成新的引物也是如此，除非重新設(shè)計新序列的引物。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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擬南芥i3樓2022-02-23 17:28:17
shuaibia6
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2樓2022-02-23 16:58:39
pennchem
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4樓2022-02-23 18:28:10
擬南芥i
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5樓2022-02-23 21:42:12
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