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wandouGGGM新蟲 (初入文壇)
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[求助]
GFP融合蛋白定位
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本來想做一個(gè)液泡定位基因，在洋蔥葉表皮細(xì)胞里用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，轉(zhuǎn)化了一個(gè)帶有液泡膜水通道蛋白的GFP融合蛋白基因，在早先已經(jīng)有不少文獻(xiàn)用這個(gè)Tip基因作為液泡膜定位信號(hào)了，但是共聚焦拍出來發(fā)現(xiàn)熒光信號(hào)并不在膜上，而是好像在整個(gè)液泡內(nèi)，PCR驗(yàn)證和測(cè)序都表明我確實(shí)是基因序列正確了，不知道是哪出了問題 @starseacow 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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請(qǐng)問您有沒有做洋蔥上表皮亞細(xì)胞定位的protocol？最近也要做這個(gè)實(shí)驗(yàn)沒有什么頭緒，另外請(qǐng)問洋蔥的選擇有什么講究嗎？紅洋蔥還是黃洋蔥？然后選取的洋蔥部位是怎樣的？是里面幾層比較好還是外面幾層比較好？像您圖中的這種是做了質(zhì)壁分離嗎？條件是什么呢？
3樓2022-03-29 21:44:44
2樓2022-02-13 11:49:31
wandouGGGM
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
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質(zhì)壁分離用25-30%蔗糖溶液處理，洋蔥沒試過黃的但文獻(xiàn)里都用的紫皮，紫皮洋蔥外面幾層細(xì)胞會(huì)有色素所以注意點(diǎn) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2022-10-15 23:20:03
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