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| 【有獎(jiǎng)交流】積極回復(fù)本帖子，參與交流，就有機(jī)會(huì)分得作者 Forzzainter 的 5 個(gè)金幣 | |||
Forzzainter新蟲 (初入文壇)
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[交流]
同源重組連載體，長(zhǎng)得菌搖不起來，大神們知道怎么回事么？
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RT 本人最近在做同源重組連接，將2-3個(gè)片段連接到載體上。 連接酶用的是擎科sosoo同源重組連接酶；載體用的是pBI121載體，長(zhǎng)度14758bp。 插入的片段大小1100bp左右；酶切位點(diǎn)用的BamH I單酶切，同源臂是擎科的技術(shù)給我設(shè)計(jì)的應(yīng)該沒問題。 載體用TAKARA的快切酶，確認(rèn)酶切開。 連接時(shí)摩爾比按兩種形式進(jìn)行計(jì)算。1載體：片段=1:10；2載體：總片段=1:10(即插入兩個(gè)片段時(shí)摩爾比為1:5:5；插入三個(gè)片段時(shí)摩爾比為1:3:3:3)。 熱激法轉(zhuǎn)入感受態(tài)，涂板過夜培養(yǎng)12-16h。第二天版上有長(zhǎng)菌，但是挑出來的菌都搖不起來，不知是什么原因。 做過pBI121空載的對(duì)照，證明感受態(tài)，平板以及含抗生素的LB液體都沒問題。也排除噬菌體干擾。 有懷疑過是不是因?yàn)檩d體太長(zhǎng)的緣故，但還是不太明白明明版上的菌長(zhǎng)得很好，為什么搖不起來。按理說同源重組應(yīng)該長(zhǎng)出來的都是陽性菌株，跪求大神解惑。  |
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3樓2020-07-26 00:01:49
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把lb重新配一個(gè)吧，我記得當(dāng)時(shí)，我?guī)屯瑢W(xué)先挑了一批，很小很小的時(shí)候挑的，搖菌長(zhǎng)起來了，后來長(zhǎng)大一點(diǎn)后，再挑的，就都沒長(zhǎng)起來，具體是因?yàn)槭裁淳筒惶宄?br />
發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2020-07-26 07:53:00
5樓2020-07-26 10:29:08
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6樓2020-07-26 21:20:07
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9樓2020-07-27 17:14:15
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